- 楼敏铭;张兴;田宝磊;刘继来;刘斌;张令强;郑晓飞;宋宜;孙志贤;
目的检测肿瘤细胞中RNA结合蛋白Ro60的表达定位,研究Ro60在肿瘤增殖和辐射敏感性中的作用。方法构建带绿色荧光素酶标签的Ro60真核表达载体,转染肿瘤细胞,观察电离辐射引发的DNA损伤反应中Ro60的表达定位规律;CCK8和锥虫蓝染色实验检测Ro60蛋白对肿瘤细胞增殖和辐射敏感性的影响。结果多种肿瘤细胞中均有较高水平的Ro60蛋白表达。γ射线诱导的DNA损伤反应中Ro60发生显著的表达上调和亚细胞定位改变。过表达Ro60的肿瘤细胞增殖延缓,细胞死亡明显增多,辐射引发的细胞增殖抑制和死亡显著增强。结论辐射引发肿瘤细胞中Ro60表达和定位改变,调控肿瘤细胞增殖和凋亡,提高肿瘤细胞的辐射敏感性。
2013年04期 v.37;No.191 241-245页 [查看摘要][在线阅读][下载 623K] - 贾庶捷;谢静;刘新;
目的观察极低频电磁场(ELF-MF)与铝负荷对学习记忆行为的影响,并初步探讨其可能机制。方法 64只雄性SPF级昆明小鼠每天接受50 Hz、2 mT ELF-MF暴露和(或)灌胃给予葡萄糖酸铝(200 mg Al3+/kg),一周6 d,共8周。8周后取大脑组织做HE染色观察小鼠脑组织病理形态变化;Morris水迷宫检测小鼠的学习记忆行为;生化方法检测小鼠大脑组织及血清中SOD活性和MDA含量。结果 ELF-MF暴露与铝负荷单独或联合暴露后小鼠的逃避潜伏期明显增长,在目标象限的停留时间比明显减少,各组与对照组相比均有显著性差异,而组间比较无显著性变化。病理切片结果显示,ELF-MF组、铝负荷组和ELF-MF+铝负荷组大脑皮质和海马区神经细胞和椎体细胞数目都出现减少,排列紊乱。通过氧化应激指标检测发现,二者均可致脑组织与血清中SOD活性明显降低以及MDA含量明显升高。结论 ELF-MF暴露与铝负荷单独或联合暴露均能够导致小鼠学习记忆障碍,其机制可能与氧化应激有关。
2013年04期 v.37;No.191 246-249+258页 [查看摘要][在线阅读][下载 460K] - 罗森;王琴;房华丽;王德慧;李崭;李涛;王慧;
目的克隆突触小泡膜蛋白(VAMP-2)基因,原核表达、纯化并鉴定重组蛋白VAMP-2活性。方法根据GenBank中已报道的VAMP-2基因序列,设计特异性引物,通过RT-PCR从小鼠的全脑组织总RNA中获得基因。将去疏水区后的基因克隆至含有N端信号肽pelB序列的原核表达载体pET-22b中,重组质粒转化BL21(DE3)Rosetta感受态细胞,IPTG诱导表达,表达产物经Ni-NTA亲和层析纯化,SDS-PAGE及Western印迹进行鉴定,并利用金属内肽酶BoNT/B轻链对该蛋白进行生物活性分析和酶活动力学测定。结果与结论成功构建pET-22b-VAMP-2表达质粒,并转化大肠杆菌BL21(DE3)Rosetta,Western印迹证实重组蛋白VAMP-2(残基Met 1-Met 94)获得可溶性表达。重组蛋白VAMP-2可被金属内肽酶BoNT/B特异性酶解,具有良好的生物学活性。
2013年04期 v.37;No.191 250-253页 [查看摘要][在线阅读][下载 473K] - 李海量;王洪涛;赵亚丽;罗国兰;张晓清;薛萌;潘耀振;周建光;
目的构建携带干扰癌基因EphA3的小干扰RNA(siRNA)慢病毒载体,并研究其对肝癌细胞7402的生长和迁徙的影响。方法构建携带EphA3 siRNA的慢病毒载体质粒并将其与外源EphA3表达质粒共转染至人胚肾细胞293T中,Western印迹检测其干扰EphA3蛋白表达的效果。将pSIH-H1-小发夹RNA(shRNA)-1504及空载体分别与3种包装质粒共转染293T细胞,包装成慢病毒lentivirus-1504及对照慢病毒。将所获慢病毒分别感染肝癌细胞7402,并加入嘌呤霉素(puromycin)筛选,1周后将细胞收集。Western印迹检测EphA3蛋白的表达水平,然后分别应用MTT实验、平板克隆形成实验、软琼脂克隆形成实验以及划痕实验检测敲低EphA3对肝癌细胞增殖能力、存活能力、恶性程度和迁移能力的影响。结果 lentivirus-1504抑制了7402细胞EphA3的表达,敲低EphA3后抑制了7402细胞的增殖能力、存活能力、恶性程度和迁移能力。结论慢病毒lentivirus-1504能够明显抑制肝癌细胞7402的生长能力、存活能力、恶性程度和迁移能力,提示EphA3可能是一个新的肝癌治疗靶点。
2013年04期 v.37;No.191 254-258页 [查看摘要][在线阅读][下载 763K] - 樊红艳;刘树玲;张晓鹏;易绍琼;房婷;董磊;于长明;
目的获得能够结合细胞表面前列腺干细胞抗原(prostate stem cell antigen,PSCA)的抗人PSCA单克隆抗体。方法以重组人PSCA蛋白为免疫原,通过杂交瘤技术制备抗人PSCA单克隆抗体,并进行ELISA、Western印迹、流式细胞术等实验筛选。结果获得6株抗人PSCA单克隆抗体,经过筛选最终得到3株能够结合细胞表面PSCA的单克隆抗体。结论获得具有结合细胞表面PSCA活性的单克隆抗体,为进一步研究和应用奠定了基础。
2013年04期 v.37;No.191 259-262页 [查看摘要][在线阅读][下载 629K] - 孙燕;肖凤君;张怡堃;孙慧燕;王华;王立生;
目的微小RNA(microRNA,miRNA)参与造血干细胞增殖分化的调节。微小RNA-486(microRNA-486,miR-486)是人胎肝组织中表达丰度较高的miRNA,但其在造血细胞分化的表达及其对分化的调控作用并不清楚。本研究旨在观察miR-486在造血细胞分化中的表达变化及调控。方法利用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-QPCR)方法检测了小鼠各组织miR-486的表达情况。分离人脐带血CD34+细胞,并在含有不同造血生长因子组合的培养体系中进行分化诱导:利用流式细胞仪检测造血细胞分化效率,并用RT-QPCR检测miR-486的表达。采用慢病毒介导的GATA1沉默策略抑制CD34+细胞的红系分化并检测miR-486的表达。结果 RT-QPCR检测了miR-486在正常小鼠各组织的表达情况,证明其在造血细胞中表达量最高。在脐带血CD34+细胞的体外定向诱导分化过程中,随着细胞向红系分化,miR-486表达增高。慢病毒介导的GATA1-小发夹RNA(shRNA)转染能够沉默脐带血CD34+细胞GATA1的表达,并阻断其向红系分化,同时,miR-486的表达水平也明显降低。结论 miR-486是一种与红系造血分化密切相关的miRNA。
2013年04期 v.37;No.191 263-266+270页 [查看摘要][在线阅读][下载 846K] - 谭小蓉;刘玉;牟春花;高亚萍;董洁;杨光;
目的通过构建金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,简称金葡菌)中SarS蛋白突变株,研究SarS蛋白在金葡菌中的调控功能。方法利用同源重组的方法构建金葡菌8325-4来源的sarS插入突变菌株,通过MDBK细胞模型检测突变株外毒素水平,以及其在高盐、高温等条件下的生长情况。结果成功构建了金葡菌8325-4来源的sarS插入突变菌株。进一步的表型检测结果显示,与野生型菌株相比,sarS突变株在高温、高渗、重金属等应激条件下的生长速度明显下降,但是细菌外毒素对MDBK细胞的杀伤作用没有明显的改变。结论 SarS蛋白在金葡菌抵抗外界压力应激中发挥着重要的功能。
2013年04期 v.37;No.191 267-270页 [查看摘要][在线阅读][下载 558K] - 王豫;关华;宋曼;王晓迪;高毅;周平坤;
目的为发掘生物发光活体成像技术的灵敏性和应用潜力,进行在体检测条件的优化和技术扩展。方法将稳定高表达荧光素酶的乳腺癌细胞(4T-1-Luc+)和肝癌细胞(Huh-7-Luc+)接种于BALB/c小鼠体内,通过活体成像仪进行生物发光检测灵敏度和毛发的影响分析,利用生物发光结合X线扩展活体成像技术。结果毛发对小鼠皮下接种的肿瘤细胞的生物发光成像有干扰作用,在局部剃除毛发小鼠内体可以检测到50个细胞的光信号值。通过建立X结合发光的检测模型,实现了既能检测发光信号值强度大小,又能比较清晰地观测到部分脏器和发光体(病变组织)的部位。结论实现了生物发光活体成像技术的检测条件优化,建立了X线结合发光新的检测模式,为扩展小动物活体成像的应用范围奠定了基础。
2013年04期 v.37;No.191 271-273页 [查看摘要][在线阅读][下载 548K] - 徐艳;余硕;姬泓巍;董铭心;王孝花;吴巧玲;戴秋云;
目的研究α-芋螺多肽Eb1.6的制备工艺,为其临床前实验奠定基础。方法采用Fmoc保护氨基酸,以Rink树脂为固相载体,N,N-二异丙基碳二酰亚胺(DIC)/1-羟基苯并三唑(HOBt)为缩合剂,手工固相法规模合成目标肽。线性肽折叠采用空气氧化法,将线性肽按0.2 mg/ml的浓度溶于0.1 mol/L NH4HCO3缓冲液中,室温下搅拌16～24 h。折叠结束后,加入Amberlite XAD16大孔吸附树脂富集,树脂用乙醇浸洗,旋转蒸发浓缩得折叠后粗品,然后进行反相纯化。结果 Eb1.6线性肽的粗产率为94.6%,Eb1.6折叠肽粗品的回收率为82.3%,粗品经C18反相纯化后纯度高于98.5%。结论以DIC/HOBt为缩合剂合成Eb1.6的纯度及产率均较高,Eb1.6折叠后用吸附树脂富集,乙醇浸泡再释放多肽,可实现缓冲体系及树脂的反复循环,降低了成本。
2013年04期 v.37;No.191 274-278页 [查看摘要][在线阅读][下载 691K] - 尹海龙;李建;董俊兴;
目的对中药白英(Solanum lyratum Thunb.)的化学成分进行研究。方法采用正相硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱及制备薄层等方法进行分离纯化,根据理化性质以及光谱数据,对得到的化合物进行结构鉴定。结果从白英全草60%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位分离得到12个单体化合物,分别鉴定为N-顺式阿魏酰酪胺(1)、N-反式阿魏酰酪胺(2)、N-反式阿魏酰奥克巴胺(3)、尿苷(4)、尿嘧啶(5)、胸苷(6)、β-吲哚羧基酸(7)、木兰苷6-甲氧基-7-O-β-D-吡喃葡糖香豆素苷(8)、1-O-β-D-葡糖吡喃糖基-(2S,3R,4E,8Z)-2-[(2-羟基十六酰)酪胺]-4,8-十八碳二烯基-1,3-二醇(9)、1-O-β-D-葡糖吡喃糖基-(2S,3R,4E,8E)-2-[(2-羟基十六酰)酪胺]-4,8-十八碳二烯基-1,3-二醇(10)、薯蓣皂苷元(11)、薯蓣皂苷元-3-O-α-L-鼠李吡喃糖基-(1→2)-β-D-葡糖苷酸糖醛酸甲酯(12)。结论化合物4、5、6、7、9为首次从茄属植物中分离得到,化合物8为首次从该种植物中分离得到。
2013年04期 v.37;No.191 279-282页 [查看摘要][在线阅读][下载 530K] - 左晓娜;肖炳坤;刘妍如;杨建云;甄蓓;黄荣清;
目的对山栀茶醇提物的抗抑郁活性部位进行筛选。方法通过小鼠悬尾实验、小鼠强迫游泳实验以及小鼠体质量变化,对山栀茶醇提物中石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇部位的抗抑郁活性进行筛选评价。结果山栀茶醇提物中正丁醇-高剂量组和乙酸乙酯-高、低剂量组都明显缩短小鼠悬尾不动时间(P<0.05);而正丁醇-高剂量组、乙酸乙酯-高、低剂量组可以明显缩短小鼠游泳不动时间(P<0.05),其中乙酸乙酯-高剂量组作用优于其他组(P<0.01)。结论山栀茶具有抗抑郁作用,活性成分主要分布在正丁醇和乙酸乙酯部位。
2013年04期 v.37;No.191 283-285页 [查看摘要][在线阅读][下载 487K] - 梁宝方;程玉芳;薛天;郭海彪;袁欣;徐江平;
目的探讨常春藤皂苷元(HG)的抗抑郁效果,为开发新型抗抑郁药提供科学的理论依据。方法采用皮质酮诱导PC12细胞损伤模型和经典的行为绝望动物模型(即小鼠悬尾实验和强迫游泳实验)对HG的抗抑郁活性进行初步研究,检测海马超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,进一步确定其药效学。结果 HG能提高皮质酮损伤PC12细胞存活率。小鼠实验结果显示,急性单次给药后,与对照组相比,HG低剂量(10 mg/kg)明显缩短小鼠悬尾不动时间。连续灌胃给药2周后,在悬尾实验和强迫游泳实验中,与对照组相比,HG在不影响小鼠自主活动能力的前提下降低小鼠不动时间,其中低剂量具有显著性差异。同时,HG能提高SOD活性,显著降低MDA含量。结论初步证实HG具有一定的抗抑郁作用,其机制可能与保护细胞及抗氧化有关。
2013年04期 v.37;No.191 286-290页 [查看摘要][在线阅读][下载 832K] - 郭长江;金宏;蒋与刚;洪燕;陈伟强;李培兵;高蔚娜;
目的分析我军男性军人体质指数、皮褶厚度、上臂肌围、体脂数据,提出正常参考值范围。方法测定1802名男性军人身高、体重、上臂围以及三头肌部、肩胛下部、髂部皮褶厚度,计算体质指数、体脂和上臂肌围,采用相关统计学方法对数据进行分析。结果按照中国健康成年人体质指数评价标准,调查对象中消瘦、超重、肥胖者分别占2.9%、8.8%和1.2%;删去消瘦、超重和肥胖者数据,推导出体脂、上臂肌围推荐正常参考值范围分别为7%～10%、21.0～26.0 mm。结论有关部门应充分重视我军目前存在的超重和肥胖的问题;本研究得出的体脂、上臂肌围正常参考范围为进一步应用奠定了基础。
2013年04期 v.37;No.191 291-293页 [查看摘要][在线阅读][下载 547K] - 郭静会;娄文辉;纪元;张顺财;
目的探讨趋化因子受体7(CCR7)和血管内皮生长因子C(VEGF-C)在胰腺癌组织中的表达与淋巴结转移之间的关系。方法应用实时荧光定量PCR和免疫组化技术检测胰腺癌和正常胰腺组织中CCR7和VEGF-C的表达情况。结果 CCR7、VEGF-C基因和蛋白在伴有淋巴结转移的胰腺癌组织中的表达显著高于不伴有淋巴结转移的胰腺癌组织;在胰腺癌组织中的表达显著高于正常胰腺组织;胰腺癌组织中CCR7与VEGF-C的表达具有显著的相关性。结论 CCR7和VEGF-C可以作为评估胰腺癌淋巴结转移的一个观测指标,与胰腺癌淋巴结转移明显相关。
2013年04期 v.37;No.191 294-298页 [查看摘要][在线阅读][下载 713K] - 张亮;陈立军;赵立;王亚林;李建涛;唐飞;黄晨;曲楠;麦海星;李学超;
目的观察生血宝合剂在治疗因服用苹果酸舒尼替尼出现骨髓抑制的临床有效性和安全性。方法对26例因服用苹果酸舒尼替尼(索坦)出现骨髓抑制的肾细胞癌患者,按中性粒细胞和血小板程度(Ⅰ级或Ⅱ级不良反应)分为两组,中性粒细胞或血小板任一指标为Ⅱ级不良反应均入中度组,给予生血宝合剂15 ml口服,每日3次,连续服用2周,服用生血宝期间索坦不减量。记录各组患者治疗前后血小板、中性粒细胞、血红蛋白的变化。观察治疗过程中不良反应的发生率。结果两组患者在服药1周后血小板、中性粒细胞、血红蛋白均明显上升(P<0.01),在服药2周后与服药前比较有明显差异(P<0.01),与服药1周比较亦有明显上升(P<0.01)。中度组各指标的上升率要大于轻度组(P<0.01)。未见明显不良反应发生。结论生血宝合剂在治疗苹果酸舒尼替尼致骨髓抑制方面有较好疗效,有效时间较长,对较严重的骨髓抑制患者的效果更明显,安全性较好。
2013年04期 v.37;No.191 299-300+310页 [查看摘要][在线阅读][下载 554K] - 温明铃;白少柏;刘泽源;王文刚;
目的通过对2008～2012年军事医学科学院附属医院抗菌药物使用情况的调查分析,评价该院近5年抗菌药物的应用状况和用药合理性。方法利用计算机管理软件检索2008～2012年军事医学科学院附属医院抗菌药物的品种、剂型、使用量和用药金额,并进行分类、排序和汇总;应用限定日剂量(DDD)法统计并计算抗菌药物的用药频度(DDDs)、日均费用(DDDc)和用药金额与DDDs的排序比,分析临床用药情况。结果军事医学科学院附属医院抗菌药物使用以注射剂型为主,年销售额占总用药金额比例最高达18.57%,抗真菌药使用金额最高,头孢菌素类药使用率最高;2011年该院抗菌药物使用呈明显调整,次年用药金额显著降低,其占总金额比例降至13.70%,用药频度显著下降,药品用量和结构均有较大变化。结论军事医学科学院附属医院抗菌药物使用基本合理,干预效果显著,但仍存在问题,须持续规范其使用,以确保临床用药更加安全、有效。
2013年04期 v.37;No.191 301-306页 [查看摘要][在线阅读][下载 588K]