- 赵太云;王勃;苏瑞斌;吴宁;从玉文;李锦;
目的克隆Ⅰ型咪唑啉受体(I1R,Nischarin)新的可变剪接体,并对其进行表达特征和亚细胞定位研究,探索其表达与I1R的差异,从而为解释I1R药理学作用多样性奠定基础。方法在本课题组前期研究基础上设计引物,通过RT-PCR从大鼠肝组织中克隆新的可变剪接体,将其克隆到pcDNA3.1、pEGFP-N1和PCMV-myc3个真核表达载体中,并通过细胞转染探索其在293T细胞中的分布,应用Western印迹测定其在真核细胞中表达蛋白的相对分子质量特征。结果成功克隆获得一个新的I1R可变剪接体(命名为I1R-ISO-472),编码472个氨基酸,与GenBank中序列号AK036043.1的新基因的序列完全一致。生物信息学分析表明,该基因染色体定位于14号染色体14B,含有磷酯酰肌醇结合位点(PX_domainsuperfamily)与亮氨酸富集重复(LRR-RIsuperfamily)两个重要的功能结构域。I1R-ISO-472在293T细胞中表达的蛋白相对分子质量约为52×103,与预测基本一致。细胞免疫荧光结果表明,其在293T细胞内呈均匀弥散分布。结论成功克隆一个新的I1R可变剪接体,其表达特征及亚细胞分布提示其药理学作用可能与已知的I1R不同。
2010年04期 v.34;No.161 301-305页 [查看摘要][在线阅读][下载 322K] - 曲秋莲;张英鸽;
目的探讨不同化学组成的纳米颗粒对人胃癌BGC-823细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)及细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平的影响。方法将不同浓度纳米活性炭(activated carbon nanoparticles,ACNP)、纳米二氧化硅(SiO2)、纳米二氧化钛(TiO2)作用于BGC-823细胞24h后,用流式细胞仪以罗丹明123(Rh123)作为荧光指示剂检测细胞MMP;用ROS捕获剂双氢罗丹明123孵育细胞,通过检测细胞内Rh123的平均荧光强度而测得细胞内ROS水平。结果经ACNP、纳米SiO2、纳米TiO2作用24h后,BGC-823细胞MMP呈剂量依赖性降低。0.1,0.2mg/mlACNP组细胞内ROS水平高于对照组(P<0.05);0.1,0.2,0.4mg/ml纳米SiO2组细胞内ROS水平呈剂量依赖性降低;0.1,0.2mg/ml纳米TiO2组细胞内ROS水平高于对照组(P<0.05)。结论 ACNP诱导细胞发生氧化应激,生成ROS,可能进一步通过活化线粒体信号转导途径诱导细胞凋亡;化学活性较强的纳米SiO2和纳米TiO2在含水介质中能够产生大量ROS,作用于细胞后能直接引起膜脂质过氧化,导致细胞膜破裂,细胞坏死。
2010年04期 v.34;No.161 306-308+312页 [查看摘要][在线阅读][下载 210K] - 张向锋;周培岚;王萧;李玉蕾;宫泽辉;
目的克隆rMrgD基因并于HEK293细胞中表达。方法利用聚合酶链反应技术,从总RNA中扩增出目的基因,克隆入真核表达载体pcDNA3.1中,构建真核表达rMrgD载体,瞬时转染人胚肾293细胞得到重组质粒表达细胞株。通过免疫荧光和Western印迹检测对表达产物进行鉴定。结果直接和间接免疫荧光实验皆表明rMrgD主要定位于细胞膜上,Western印迹检测证实rMrgD在HEK293细胞主要以单体和二聚体形式存在。结论含有rMrgD基因的重组质粒在人胚肾293细胞中获得表达,主要定位于细胞膜上。本研究为进一步探究rMrgD受体的功能奠定了基础。
2010年04期 v.34;No.161 309-312页 [查看摘要][在线阅读][下载 260K] - 王慧敏;邹亮;邢玉华;董桂福;刘刚;张部昌;陈惠鹏;
目的构建表达重组人proEMAPⅡ蛋白N端(p43N)及C端(p43C)结构域,并进行活性鉴定。方法分别在大肠杆菌中表达p43N及p43C蛋白,并纯化获得目的蛋白;利用血管内皮细胞管腔形成实验及细胞迁移实验进行活性鉴定,并比较等摩尔浓度下,p43蛋白、p43N、p43C及p43N+p43C的活性差异。结果 p43N及p43C均具有抑制内皮细胞管腔形成和迁移的活性,在等摩尔浓度条件下,p43蛋白的生物活性高于p43N和p43C,p43N活性最弱,但p43N和p43C共同作用时,抑制活性高于单独作用。结论获得具有生物活性的p43N及p43C蛋白,为进一步确定p43N作用机制及其与p43C相互关系奠定了基础。
2010年04期 v.34;No.161 313-316页 [查看摘要][在线阅读][下载 232K] - 邢玉华;刘大涛;刘刚;邹亮;胡立德;付学奇;陈惠鹏;
目的建立proEMAPⅡ/p43蛋白体外检测抑制新生血管生成活性的方法。方法利用内皮细胞增殖实验、细胞周期实验、细胞迁移实验、管腔形成实验、鸡胚绒毛尿囊膜实验等体外检测血管生成的模型,研究p43蛋白抑制血管生成的活性。结果 p43蛋白能明显抑制内皮细胞迁移和管腔形成,但对内皮细胞增殖和细胞周期没有明显的量效关系。结论最终选用细胞迁移实验和管腔形成实验作为主要活性检测方法,细胞迁移实验作为p43蛋白活性的定量检测方法,迁移抑制率作为活性高低的评价标准,管腔形成实验用于p43蛋白活性的定性研究。
2010年04期 v.34;No.161 317-320页 [查看摘要][在线阅读][下载 250K] - 刘丽卉;李峰生;李娜;董波;周仕香;陈肖华;
目的观察利用小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)技术下调人胰腺癌BxPc-3细胞中钙结合蛋白S100A4表达后对细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法设计合成针对S100A4的特异性siRNA,转染至人胰腺癌BxPc-3细胞,以Western印迹检测转染前后S100A4蛋白表达变化;克隆形成率实验检测转染前后BxPc-3细胞增殖能力;Transwell小室模型检测转染前后BxPc-3细胞迁移和侵袭能力变化。结果 Western印迹结果显示BxPc-3细胞转染S100A4siRNA48h后,S100A4蛋白表达明显下调;Transwell小室验证转染S100A4siRNA后细胞的迁移和侵袭能力明显降低。结论本研究结果表明,S100A4表达下调后可抑制胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,提示S100A4可以作为一个潜在的肿瘤治疗靶标。
2010年04期 v.34;No.161 321-323页 [查看摘要][在线阅读][下载 235K] - 吴光晓;杨日芳;宋睿;苟红艳;苏瑞斌;李锦;
目的研究多巴胺D3受体拮抗剂Y-QA14对精神分裂症的药理学作用。方法采用甲基苯丙胺(0.5mg/kg,i.p.)和MK-801(0.25mg/kg,i.p.)诱发高活动性、阿扑吗啡(2mg/kg,s.c.)诱发攀爬、5-羟色胺酸(5-HTP,150mg/kg,i.p.)诱发甩头等模型,评价Y-QA14潜在的抗精神分裂症作用。结果 Y-QA14(5,10,15mg/kg)本身影响小鼠自发活动不显著(P>0.05),但能抑制甲基苯丙胺(P<0.01)和MK-801诱发的小鼠高活动性(P<0.05)。Y-QA14(5,10,20mg/kg)抑制阿扑吗啡诱发的攀爬(P<0.05)及5-HTP诱发的甩头(P<0.001)。结论 Y-QA14对精神分裂症可能具有一定的治疗作用。
2010年04期 v.34;No.161 324-327页 [查看摘要][在线阅读][下载 223K] - 袁媛;宋婷;黄蓓;钟辉;
目的构建凋亡相关的斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)真核表达质粒。方法从人胚肾细胞系HEK293T细胞的总RNA中经过逆转录和PCR获得ASC的全长cDNA双链片段,经过酶切后连接到真核表达载体pcDNA3/flag中,挑选出转化生成的阳性克隆测序,将序列正确的重组质粒命名为pcDNA3/flag-ASC。脂质体转染pcDNA3/flag-ASC质粒到HEK293T细胞中,用Western印迹检测目的蛋白的表达。同时用免疫沉淀和免疫印迹方法检测ASC蛋白与前半胱天冬酶(pro-caspase)-1的相互作用,并用ELISA方法检测ASC蛋白对IL-1β分泌的影响。结果 Western印迹实验证明pcDNA3/flag-ASC可以在HEK293T细胞中表达ASC,并且可以与pro-caspase-1结合,使IL-1β分泌明显降低。结论构建了重组质粒pcDNA3/flag-ASC,在细胞中表达ASC后具有与pro-caspase-1结合的能力,并具有降低IL-1β分泌的生物活性。
2010年04期 v.34;No.161 328-330+369页 [查看摘要][在线阅读][下载 226K] - 林方;熊伟;康晓平;李永强;刘洪;李辉;祝庆余;杨银辉;
目的建立一种可以同时检测人类A型流感病毒,B型流感病毒及A型流感病毒H1,H3,H5亚型的多重RT-PCR方法。方法根据人类流感病毒的特异性基因设计并合成多对特异性引物,建立可同时扩增出人类流感病毒亚型特异性片段的多重PCR的方法。同时,对该方法的特异性和敏感性进行了评价,并利用该方法对39份疑似swineH1N1的临床标本进行检测。结果该方法可同时扩增出A型流感病毒M基因203bp,B型流感病毒M基因296bp,A型流感病毒亚型的HA基因片段长度分别为362bp(H1),112bp(H3),188bp(H5),494bp(swineH1)。该实验最低可检测新甲型H1N1(A/Beijing/501/2009)病毒RNA0.5TCID50。该方法的特异性实验结果显示,在多重PCR检测中未检出非特异扩增的PCR产物。同时,使用该方法从39份疑似新甲型H1N1的临床咽拭子标本中检测出新甲型H1N1阳性的标本4份(10.2%),季节性H1N1亚型2份(5.1%),H3N2亚型12份30.7%,本次实验结果与WHO通过实时PCR方法检测的结果一致。结论本研究建立的多重PT-PCR方法快速、敏感,特异性强,可用于人类流感病毒的分型检测。
2010年04期 v.34;No.161 331-333+344页 [查看摘要][在线阅读][下载 270K] - 马树梅;黄训端;王永中;刘道琴;刘惠;曹诚;陈惠鹏;张部昌;
目的探讨红色糖多孢菌KR6基因突变体生物合成3-脱氧-3羰基-赤酮酸内酯B(DOEB)产量显著降低的原因。方法以KR6基因突变体M菌株为研究对象,采用相对实时荧光定量RT-PCR技术、抗原-抗体检测技术和高分辨LC-MS分析技术等,分别从基因的转录水平、翻译水平以及聚酮化合物水平等层面研究了DOEB的生物合成量。结果红色糖多孢菌M菌株与出发菌株A226相比,两者聚酮合酶(PKS)基因簇在转录水平和翻译水平上的表达差异均非造成DOEB产量降低的限速因子;而DOEB的前体转化能力却大幅度降低,因此,DOEB合酶的活力降低是造成生物合成DOEB产量降低的关键因素。结论 DOEB合酶的活力是生物合成DOEB的限速因子,本研究为进一步探讨利用基因工程途径提高新酮内酯类化合物产量奠定了基础。
2010年04期 v.34;No.161 334-339页 [查看摘要][在线阅读][下载 511K] - 叶霖财;肖智勇;周文霞;张永祥;
目的优化四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)肝纤维化动物模型的造模方法。方法对肝纤维化模型从CCl4剂量、造模途径和动物种属等方面进行优化。造模剂量优化时采用昆明小鼠,腹腔注射CCl40.5、0.75、1.0ml/kg,2次/周,共8周,于第9周开始停止注射CCl4,观察至第12周;造模方式优化时采用ICR小鼠,CCl4腹腔注射或灌胃,2次/周,共12周;动物种属优化时,选择ICR小鼠和SD大鼠,CCl4灌胃,2次/周,共12周。行苏木精-伊红染色和马松三色染色观察动物的肝脏病理学改变。结果选用不同剂量的CCl4腹腔注射后,在第10周,0.5ml/kgCCl4造模仅在汇管区形成纤维化,0.75ml/kgCCl4则形成了纤维间隔,而1ml/kgCCl4造模可以形成早期肝硬化,提示适当的CCl4剂量为1ml/kg。灌胃和腹腔注射的方式均能导致明显的肝纤维化,其中灌胃方式死亡率在10%以下,而腹腔注射方式造模死亡率在80%以上,提示灌胃造模动物耐受性较好。应用CCl4后,大鼠和小鼠肝纤维化的各指标变化趋势一致,大鼠变化更为明显。结论 CCl4致肝纤维化模型的建立宜采用1ml/kgCCl4灌胃的方法,可根据实验目的选用不同种属的动物。
2010年04期 v.34;No.161 340-344页 [查看摘要][在线阅读][下载 391K] - 李玉凤;韩刚;丁日高;王全军;李炳坤;
目的探讨放置时间和温度对Beagle犬血浆凝血指标测定的影响。方法 Beagle犬血浆分别放置于室温(25℃)和冷藏(4℃)条件下,于不同放置时间(0,2,4,6h)采用Stago全自动血凝仪测定凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血活酶时间(APTT)。结果雌雄动物间PT、APTT检测结果在不同放置条件下均未见显著性差异。在室温(25℃)条件下,PT和APTT在4h内稳定;在冷藏(4℃)条件下,PT在2h内稳定,APTT在4h内稳定。结论 Beagle犬的PT和APTT测定应在室温条件下4h内完成。
2010年04期 v.34;No.161 345-346页 [查看摘要][在线阅读][下载 70K] - 刘克洋;杜茜;温占波;杨文慧;李娜;董晓凯;胡凌飞;王洁;李劲松;鹿建春;
目的评价PBS、SM液、营养肉汤3种不同的采样液对分枝杆菌噬菌体D29的收集能力;D29在3种不同喷雾介质(生理盐水、去离子水和PBS)中的耐雾化性能;PBS作为采样液时,收集到的D29浓度随时间变化趋势。方法用全玻璃液体冲击式采样器AGI-30收集D29气溶胶并进行判定。结果与结论噬菌体D29在含有微量Tween80的PBS中耐冲击性能最强,将其用于采样能够准确反映气溶胶的浓度,而去离子水作为喷雾介质时,D29气溶胶具有最大的产出量。在D29气溶胶的动物暴露实验中,选择去离子水为喷雾液用于产生气溶胶,采样液为含微量Tween80的PBS。
2010年04期 v.34;No.161 347-350页 [查看摘要][在线阅读][下载 180K] - 刘小青;朱力;冯尔玲;马姗姗;魏华;王恒樑;
目的研究翻译后修饰基因cobB和gtrⅡ对志贺菌致病能力的影响。方法采用λ-Red重组系统构建福氏2a志贺菌2457T的cobB,gtrⅡ缺失突变株,进行初步的毒力评价,随后制备野生株,cobB,gtrⅡ缺失突变株的全菌蛋白样品,并进行双向电泳比较野生株和缺失株在蛋白表达谱上的差异。结果成功构建cobB、gtrⅡ基因的缺失突变株,豚鼠角膜实验发现cobB、gtrⅡ缺失株症状稍弱于野生株,但在全菌蛋白表达谱中野生株和突变株并无明显差异。结论双向电泳难以有效地呈现CobB和GtrⅡ的翻译后修饰能力。
2010年04期 v.34;No.161 351-355页 [查看摘要][在线阅读][下载 350K] - 贾宏瑾;汤洁;李玉霞;孙芳;凌焱;张部昌;梁龙;陈惠鹏;
目的利用CMV启动子构建CVB3感染性克隆载体。方法将质粒pcDNA3.1(+)的CMV启动子下游区域通过PCR技术替换成设计好的多克隆位点区,分别插入PCR合成的HdvRz核心序列和polyA尾片段,形成框架载体pc-H-A,通过瞬时转染HeLa细胞初步鉴定pc-H-A的可用性;用本室保存的CVB3(nancy株)感染HeLa细胞,取感染液上清提取病毒RNA,利用长链RT-PCR和长链PCR技术反复优化条件扩增病毒基因组全长片段,将此全长片段克隆至设计好的框架载体pc-H-A中,筛选阳性克隆,并对其进行测序鉴定。结果与结论构建了带有CMV启动子的框架载体pc-H-A并初步鉴定了该载体可用,利用此框架载体构建了与基因库中序列相似性为99%的CVB3全长cDNA克隆pc-CVB3-H-A。该研究为进一步鉴定所构建的CVB3全长克隆的感染性提供了基础,并为后续在病毒学研究和基因治疗方面的研究提供了手段。
2010年04期 v.34;No.161 356-360页 [查看摘要][在线阅读][下载 284K] - 程波;孙锁柱;权兰菊;吴西钊;王新允;
目的研究尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)及其受体(uPAR)在人肺癌中的表达及其与肺癌临床病理特征的关系。方法通过免疫组织化学方法检测101例肺癌组织及7例正常肺组织中uPA、uPAR的表达情况,利用CMIAS2000型多功能真彩病理图像分析系统测量计算各病例中uPA、uPAR蛋白阳性细胞的平均光密度(AOD)和积分光密度(IOD)。结果 uPA、uPAR在肺癌组织中表达的阳性率高于正常肺组织,二者在非小细胞肺癌(NSCLC)的表达强于小细胞肺癌(SCLC)但均不具有显著性差异;二者在不同组织学类型、不同分期肺癌中的表达均不具有显著性差异;uPAR与肺癌分级呈显著正相关;uPA、uPAR与肺癌淋巴结转移密切相关,与合并分期显著正相关;二者之间均存在显著正相关关系。结论 uPA、uPAR参与肺癌侵袭转移,且二者具有协同作用。
2010年04期 v.34;No.161 361-363页 [查看摘要][在线阅读][下载 207K] - 陈青;赵家军;郑冬梅;张海清;韩文霞;李秋;姜秀云;管庆波;
目的研究不同甲状腺功能状态下血脂的特点及甲状腺功能与血脂的关系。方法收集甲亢、甲减、亚临床甲亢、亚临床甲减和正常甲功者共568例,分析各组血脂谱的差别,并应用相关及多重回归分析影响这些指标的因素。结果甲亢时TC、TG、HDL、LDL、ApoB降低;而甲减时TC、LDL、ApoB升高,HDL降低;亚临床甲减较亚临床甲亢对代谢影响更大,可出现TC、LDL、ApoB升高;而亚临床甲亢组上述指标均无明显变化。TSH对甲亢组TC、LDL、ApoB,甲减组TC和亚甲减组血脂谱影响较大。结论甲状腺功能状态与血脂等代谢指标相关,且TSH与血脂异常关系密切。
2010年04期 v.34;No.161 364-366页 [查看摘要][在线阅读][下载 128K] - 陈娟;陈兵;魏东宁;
目的探讨重症肌无力(myasthenia gravis,MG)与亚临床甲状腺病变并存的临床特点。方法对2009年1月至2010年5月总参谋部总医院(解放军309医院)MG治疗中心确诊的508例MG患者中伴亚临床甲状腺病变的31例患者的临床和实验室资料进行回顾性分析。结果 MG伴亚甲减(亢)患者中,女性、眼肌受累率高,年龄构成无明显特点。TSH>10.0μU/ml较TSH<0.1μU/ml伴发MG全身型发病率高。MG伴亚甲亢TSH均值TPOAb阳性组大于抗体阴性组,甲状腺激素小于抗体阴性组;MG伴亚甲减则相反。结论 MG伴亚临床甲状腺病变以眼肌为器官特异性;女性免疫更敏感;MG伴亚甲减较伴亚甲亢病情重;TPOAb对病情程度有影响。
2010年04期 v.34;No.161 367-369页 [查看摘要][在线阅读][下载 106K] - 王宁;盛立;
目的分析生物安全领域研究热点及学科发展等信息。方法基于Java平台的知识图谱分析软件CiteSpaceⅡ。结果对生物安全相关文献期刊共被引、关键词共现、文献共被引以及国际合作等进行可视化分析,展示出生物安全领域研究热点变化、关键文献和关键词等信息。结论快速把握学科发展趋势以及研究热点变化,为生物安全研究者提供指引与参考。
2010年04期 v.34;No.161 370-372页 [查看摘要][在线阅读][下载 251K] - 李立;王小磊;赵东升;
目的构建网络化的生物医学专题信息跟踪与服务系统,为科学研究和领导决策提供信息支持。方法以MyEclipse6.5、Mysql5.1、Tomcat6.0为开发工具,以J2EE轻型构架为技术支撑,应用网络爬虫、全文检索、信息推送等技术实现系统的各项功能。结果和结论生物医学专题信息跟踪与服务系统实现了对互联网上的生物安全等专题信息进行跟踪、抓取、转换、分类和入库,以及信息的快速发布、分类导航、全文检索和个性化服务,能够主动、及时地为用户提供最新的生物医学专题信息。
2010年04期 v.34;No.161 373-375页 [查看摘要][在线阅读][下载 196K]